Hoechst boyası
Hoechst boyaları floresans mikroskopisinde ve akış sitometresinde DNA'yı işaretlemek için kullanılan floresan boyalardandır. Bu boyalar DNA'yı işaretlediği için, ayrıca mitokondrileri boyamakta da kullanılır. bis-benzimid türü olan bu boyalardan iki tanesi yaygın olarak kullanılır: Hoechst 33258 ve Hoechst 33342.[1]
Her iki boya da morötesi ışık ile 350 nm civarında uyarılır, her ikisi de 461 nm yayım maksimumunda mavi/siyan renkte floresan ışık yayarlar. Hoechst boyaları canlı veya fikse edilmiş hücrelerde kullanılabilirler, çoğu zaman bir diğer nükleik asit boyası olan DAPI (4',6-diamidino-2-fenilindol) yerine kullanılırlar. Aralarındaki en önemli fark, Hoechst 33342'deki ek etil grubunun onu daha lipofilik yapması ve dolayısıyla hücre zarı ile etkileşmesini daha muhtemel kılmasıdır. Bazı uygulamalarda Hoechst 33258 belirgin derecede daha az zar geçicidir.
Bu boyalar ile, standart bir floresan yayım - miktar eğrisine bakılarak, bir numunedeki DNA miktarı tespit edilebilir.
Hoechst boyaları DNA'ya bağlandığı için hücre bölünmesi sırasında DNA ikileşmesini bozabililer. Dolayısıyla potansiyel olarak mutajenik ve kanserojeniktirler. Kullanım ve atımlarında gerekli tedbirler alınmalıdır.
Hoechst boyaları insan ve diğer hayvanlarda sperm ayrımı için de kullanılırlar.[2][3]
Dış bağlantılar
değiştir
- Hoechst stains Invitrogen
Kaynakça
değiştir- ^ Hawley, Robert C.; Teresa S. Hawley (2004). Flow Cytometry Protocols (Methods in Molecular Biology (Clifton, N.J.), V. 263.). Totowa, NJ: Humana Press. ISBN 1-58829-235-5.
- ^ Ashwood-Smith, M.J. (1994). "Safety of human sperm selection by flow cytometry". 9 (5). Oxford University Press. ss. 757-759. 30 Mayıs 2020 tarihinde kaynağından arşivlendi. Erişim tarihi: 22 Şubat 2011.
- ^ Parrilla, I; Vázquez, J M (2004). "Hoechst 33342 stain and u.v. laser exposure do not induce genotoxic effects in flow-sorted boar spermatozoa". Reproduction. 128 (5). ss. 615-621. doi:10.1530/rep.1.00288. 6 Eylül 2008 tarihinde kaynağından arşivlendi. Erişim tarihi: 22 Şubat 2011.