Gram boyama yapmak için hazırlanmış preparatın üzerine kristalkristalize viyoleviyolans boyası damlatılıp 110 dakika beklenir ve iyot-lugollugon çözeltisi ile yıkanarak kristalkristalize viyoleviyolans uzaklaştırılır. Preparata tekrar iyot-lugollugon çözeltisi damlatılarak 13 - 2 dakika bekletilip, distile su ile iyice yıkanarak iyot-lugol çözeltisi uzaklaştırılır. Preparatın üzerine %96.2 'lık etil alkol veya eter – aseton çözeltisi damlatılarak 15 - 3080 saniye beklenir, distile su ile yıkanır ve karşıt boya olarak safraninsafaranin damlatılır ve 403 - 505 saniye bekletilir. Preparat distile su ile yıkanarak havada kendi halinde kurumaya bırakılır, preparata immersiyon yağı damlatılır ve 100 'lük objektifle incelenir. Mor renkli bakteriler Gram pozitif, pembe-kırmızı renkli bakteriler ise Gram negatif olarak değerlendirilir. Gram boyama için gerekli olan tüm çözeltiler hazır ticari kitler halinde de pazarlanmaktadır.
